生物显微镜常见问题

发布人:山东爱博科技贸易

发布时间:2018-08-22

单色CCD看荧光的效果为什么好?
彩色相机是在单色相机的基础上,每个像素上加上拜耳滤片(Bayer filter)带来色彩信息,但滤片透射率蓝色约25%,绿色约30%,红色约40%,会带来额外的光损失,所以彩色相机不如单色相机灵敏,拍弱信息号时效果比单色相机差。

如何辨别物镜的分辨率和清晰度?

物镜分辨率最关键的参数为NA值,根据分辨率公式:R=0.61λ/NA,NA值越大,R越小,说明分辨率越高,采集的图像细节越清晰,因此NA值越高的物镜分辨率更高。但最终系统分辨率不仅与物镜有关,还与聚光镜、中间变倍等因素相关,尤其在显微成像中,相机设备的像元大小需要与物镜的放大倍率和分辨率相匹配才能获得最佳的图像分辨效果。
清晰度单就物镜而言,与物镜的像差校正能力有关,通过校正彗差、球差、场曲、色差等因素,提高图像的色彩还原、平场性和对比度等,使图像更清晰。物镜的像差校正本领越好,图像质量越好,按照物镜性能从低到高依次有平场物镜、平场消色差物镜、平场半复消色差物镜、平场复消色差物镜和平场超级复消色差物镜等。
一般而言,物镜透镜组越多,物镜的性能越好!

物镜带虹彩光阑有什么好处?
“Iris”为虹彩光阑物镜标识,说明该颗物镜具有虹彩光阑调节环,通过虹彩光阑调节物镜的NA(数值孔径),以满足不同观察需要。如,暗视场镜检时,往往由于某些原因而使照明光线进入物镜,使视场背景不够黑暗,造成镜检质量的下降。这时调节光阑的大小,使背景变黑,使被检物体更明亮,增强镜检效果。图7所示为一颗NA值0.65-1.35的虹彩光阑物镜。

孔径光阑开度与图象质量关系

孔径光阑安装在聚光镜内,研究用显微镜的聚光镜外侧边缘上都有刻数及定位记号,这样便于调节聚光镜与物镜的数值孔径相匹配。标准科勒照明条件时,更换物镜时需调整聚光镜的数值孔径,一般物镜的数值孔径乘0.7-0.8就是聚光镜的数值孔径,此范围内,达到分辨率和对比度的最佳平衡。
孔径光阑开到最大,系统分辨增大,但是图像对比度降低。孔径光阑关小,图像对比度增加,但空间分辨率降低。因此,一般采取的做法是将孔径光阑开到所用物镜NA值的70%-80%。

荧光激发块的宽带和窄带是什么意思?

BAND PASS filte,叫做带通滤色片,是指只让一定波段范围内的光通过。其余波段的光都被吸收或者反射。通常会标出该带通滤色片的透过范围,如图6所示,”BP360-370”代表激发滤色片透过360nm-370nm的光,带通滤色片的另一常见写法为“615/40”,代表让595~635nm的光通过,这里的615是指中心波长,40是指带宽。带通滤色片可以具有针对性地选择波长范围,提高图像信号的特异性,过滤杂散光。
U-FBN,BP470-495,带宽25nm为窄带类,U-FBW,BP460-495,带宽35nm为宽带类,带宽越窄对波长的选择越具特异性。

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